Реакция микрогемагглютинации с бледными трепонемами (МНА-ТР) является вариантом ТРПГА. Ее ставят на пластинках для микротитрования. Она требует по сравнению с ТРПГА намного меньшего количества сыворотки, адсорбирующего разбавителя и антигена. Окончательный результат получают уже после 4 ч инкубирования сыворотки. Автоматизированная реакция микрогемагглютинации с бледными трепонемами (АМНА-ТР) благодаря автоматизации процессов заполнения тест-пластин и разведения сыворотки еще проще и обходится еще дешевле, чем реакция АМН-ТР. Она особенно пригодна при массовых обследованиях на сифилис.

Клиническая оценка результатов серологических реакций.
При первичном серонегативном периоде сифилиса бывают положительными РИФ и реакция Колмера как наиболее чувствительные серореакции. Однако это не является основанием для постановки таким больным диагноза первичного серопозитивного сифилиса. У ряда больных в этом периоде бывает изолированный положительный результат при постановке реакции Вассермана с трепонемны-ми или с кардиолипиновым антигенами. В конце 3-й или в течение 4-й недели после появления первичной сифиломы становятся положительными стандартные серологические реакции – с этого момента начинается первичный серопозитивный период сифилиса. На 1-2-й неделе первичного серопозитивного сифилиса отмечается увеличение степени позитивности серореакции (1+, 2+, 3+) и нарастание титра реагинов (1:5, 1:10, 1:20). РИФ и реакция Колмера уже у всех больных дают резко положительный результат, но РИБТ, как правило, отрицательная или процент иммобилизации очень низок. Диагноз первичного серопозитивного сифилиса ставится и тем больным, у которых осадочные реакции и реакция Вассермана с неспецифическими антигенами дали даже однократный слабоположительный результат. При дальнейшем течении первичного сифилиса все серологические реакции становятся резко положительными (4+); титр реагинов достигает 1:80, 1:160, РИФ продолжает быть резко положительной, но РИБТ у большинства больных еще остается отрицательной или может стать слабоположительной.
При вторичном свежем сифилисе резко положительный результат по всем стандартным серологическим реакциям наблюдается почти в 100% наблюдений; титр реагинов наиболее высок – 1:160; 1:240 или 1:320. РИФ – 4+; РИБТ дает положительнй результат более чем у половины больных, однако процент иммобилизации трепо-нем невысок (40-60%).
При вторичном рецидивном сифилисе положительный результат по стандартным серологическим реакциям отмечается в 96-98% наблюдений. Отрицательные результаты могут иногда объясняться малосимптомным рецидивным течением, наличием астенизации и сочетанием сифилиса и ВИЧ-инфекции. РИБТ дает положительный результат у 85-90% больных при выраженной степени иммобилизации – 80-90-100%.
Третичный сифилис характеризуется положительными результатами по стандартным серологическим реакциям в 50-90% наблюдений и положительной РИБТ у 92-100% пациентов с высоким процентом иммобилизации.
Диагноз скрытого серопозитивного сифилиса, как указывалось выше, устанавливают только по положительным серореакциям в крови с обязательным подтверждением их по РИБТ, так как только РИБТ (и в меньшей степени РИФ) позволяет отдифференцировать ложноположительные серореакции (даже с позитивностью в 2+ или 3+) от истинно положительных.
Разные формы сифилиса нервной системы и висцерального сифилиса имеют различную частоту и выразительность стандартных серореакции. Так, прогрессивный паралич в 100% случаев сопровождается резко положительными всеми стандартными серологическими реакциями. Сифилис сосудов мозга, спинная сухотка, сифилитическое поражение сердечно-сосудистой системы сопровождаются положительными серореакциями лишь в 40-50-60% наблюдений. Однако РИБТ почти при всех перечисленных патологических состояниях дает резко положительный результат (90-100% иммобилизации).
При диагностировании врожденного сифилиса в первые 2 мес после рождения стандартные серологические реакции у ребенка не определяют, т. к. они могут быть положительными за счет пассивной передачи реагинов через плаценту. По этой же причине не имеет значение и положительный результат РИБТ. Пассивно переданные от матери ребенку имобилизины самопроизвольно исчезают в течение 6 мес после рождения. Если ребенок инфицируется незадолго до родов, то в этом случае РИБТ будет еще отрицательной (в связи с более поздним образованием иммобилизинов), несмотря на наличие в организме ребенка сифилитической инфекции.
При врожденном сифилисе детей грудного возраста с активными проявлениями стандартные серореакции могут быть отрицательными в 1% наблюдений.
При врожденном сифилисе раннего детского возраста отрицательные стандартные серореакции варьируют от 15 до 20%, но в этих случаях РИБТ дает положительные данные у 90-98% детей.
При позднем врожденном сифилисе даже при наличии активных проявлений стандартные серореакции констатируются лишь у 70-80% обследованных, но зато РИБТ четко положительная у 100% больных с высоким титром иммобилизинов.

Современные усовершенствованные серореакции с использованием принципов иммуноферментных констант.
Несмотря на значительное количество тестов для серодиагностики сифилиса, их высокую чувствительность и специфичность имеется ряд состояний при которых данные серодиагностики требуют проверки и дополнительных исследований. Например, у пациентов, полноценно леченных по поводу сифилиса, иногда длительное время остаются положительными серореакции. Это объясняется состоянием серорезистентности, которое до настоящего времени не получило научной трактовки. Затрудняется также дифференциальная диагностика неведомого сифилиса от рецидива процесса и реинфекции. С целью разработки более информативных вариантов серореакции были использованы детали антителообразования у больных сифилисом, с предложением и исследованием следующих вариантов серореакции: метод иммуноферментного анализа (ИФА), метод иммуноблоттинга (IgM-серология), полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Иммуноферментный анализ.
Метод иммуноферментного анализа (ИФА, The enzymelinked immunosorbent Assay, Elisa) широко используется для диагностики сифилиса. Принцип реакции заключается в соединении сифилитического антигена, сорбированного на поверхности твердофазного носителя, с антителом испытуемой сыворотки крови и выявления специфического комплекса антиген – антитело с помощью антивидовой иммунной сыворотки, меченной ферментом. Взаимодействие фермента с субстратом дает цветную реакцию, интенсивность которой зависит от количества связанных сывороточных антител.
В нашей стране методика постановки ИФА для серодиагностики сифилиса с отечественными ингредиентами разработана в отделе микробиологии ЦНИКВИ. При исследовании 1609 образцов сыворотки крови и спинномозговой жидкости выявлена чувствительность, составившая 95,2%, и высокая специфичность. Отрицательные результаты ИФА у полноценно леченных больных сифилисом могут служить критерием излечения (Дмитриев Г.А.). При автоматизированном учете результатов эта реакция используется для профилактического освидетельствования на сифилис больших групп обследуемых: доноров, беременных и др.
Тест для выявления IgG (Captia Syphilis G test) – тест-ловушка использует в качестве антигена очищенные патогенные трепонемы. У больных с вторичным, ранним и поздним сифилисом и нейроси-филисом и у реинфицированных пациентов чувствительность теста 100%. Тот же принцип ловушки для антител применен с целью определения сывороточных IgM (Дмитриев Г.А., Брагина Е.Е.).
Метод иммуноблоттинга.
При проведении иммуноблоттинга трепонемы подвергаются электрофорезу с разделением белковых иммунодерминант на нитроцеллюлозе. Затем производится обработка разделенных точек исследуемой сыворотки и антителами к IgG либо IgM, меченными ферментами или радиоактивными веществами.
lgM-серология.
При изучении антителообразования в организме больных сифилисом установлено, что первыми после заражения вырабатываются специфические IgM, выявляемые уже на 2-й нед после заражения и достигающие максимальной концентрации в крови на 6-9 нед. Через 6 мес после окончания терапии у большинства больных в крови они не определяются, На 4-й нед после инфицирования организм начинает продуцировать в достаточной степени специфические IgG. Этот вид иммуноглобулинов в наибольшем количестве определяется через 1 –2 года после заражения. Заслуживает особого внимания то, что специфические IgM перестают вырабатываться при исчезновении из организма антигена, а секреция IgG продолжается клонами клеток памяти. Кроме того, крупные молекулы IgM не проходят через плаценту от матери к плоду, в связи с чем по их наличию у ребенка судят об его инфицировании бледной трепонемой.
Ввиду того, что концентрация в крови специфических IgM закономерно снижается после эффективного лечения, рост титра этих антител может служить вспомогательным признаком наличия рецидива заболевания или реинфекции (В.Н.Беднова). В 1997 г. предложена реакция 19S IcM-FTA-ABS, а затем 19S IgM-TPHA. В основе этих тестов лежит разделение с помощью гельфильтрации испытуемых сывороток на 19S IgM и 7IgG и выявление первых с помощью иммунофлюоресцентного метода и теста гемагглютгинации. Затем была предложена реакция гемадсорбции на твердофазном носителе IgM-SPHA, объединяющая элементы постановки ИФА и РПГА, а также 19SIM-SPHAH IgM-TP-ABS-ELISA. IgM-SPHA-тест наиболее пригоден для характеристики сифилитического процесса и в ЦНС в частности, а также отличия рецидива заболевания от реинфекции.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР).
Метод заключается в многократном увеличении (амплификации) количества ДНК выявляемого микроорганизма. Разработка вариантов ПЦР для диагностики сифилиса обусловлена недостаточностью стандартных тестов при раннем серонегативном, врожденном сифилисе и нейросифилисе. ПЦР является превосходным методом для диагностики сифилиса при небольшом количестве трепонем в исследуемом материале. Большим достоинством ПЦР является возможность автоматизации реакции путем заданного циклического температурного режима для определяемой за счет меченных праймеров цветной реакции. Остается невыясненным вопрос – отражает ли наличие трепонемной ДНК присутствие жизнеспособных трепо-нем или это могут быть остатки погибших микроорганизмов, содержащие способную к амплификации ДНК.
Применение ПЦР может иметь большое значение при диагностике врожденного сифилиса (пассивный трансплацентарный перенос антител не влияет на результаты теста), нейросифилиса, первичного серонегативного сифилиса (в настоящее время единственным критерием является прямое микроскопическое обнаружение трепонем), а также у больных, у которых диагностика сифилиса с помощью обычных серологических реакций затруднена из-за ин-фицирования ВИЧ (Дмитриев Г.А., Брагина Е.Е.).
Исследование спинномозговой жидкости.
Особое внимание уделяется исследованию спинномозговой жидкости (ликвора) для определения пораженности сифилисом нервной системы, как критерий качества лечения у лиц с патологическими изменениями в ликворе до начала лечения и как один из критериев излеченности больных.
Спинномозговую жидкость получают при люмбальной пункции. Место прокола соответствует точке пересечения двух линий: вертикальной (идет вдоль остистых отростков) и горизонтальной (линия Якоби). Горизонтальная линия должна соединять гребни подвздошных костей и проходить между остистыми отростками позвонков.
В пробирку собирают 7-8 мл (но не более 10 мл) спинномозговой жидкости. Это количество распределяют в две пробирки, одну из которых направляют в клиническую лабораторию, а другую – в серологическую лабораторию.
В клинической лаборатории исследуют цитоз, содержание белка, глобулиновые реакции Панди и Нонне-Апельта. Минимальные патологические изменения в спинномозговой жидкости следующие: содержание белка, начиная с 0,4%, цитоз – 8 клеток в 1 мкл, глобулиновые реакции (реакция Нонне – Апельта++, реакция Пан-ди+++; реакция Ланге – больше двух двоек в цифровом значении, положительная реакция Вассермана). Показатели выше указанных, даже будучи изолированными, свидетельствуют о выраженных патологических изменениях в спинномозговой жидкости. Патологической считается также такая спинномозговая жидкость в которой несколько показателей изменены соответственно данным минимальной патологии, а реакция Вассермана положительна. Концентрация белка в спинномозговой жидкости свыше 400 мг/л и число клеток в ней более 5000 на 1 л свидетельствуют о воспалительном процессе в ЦНС. Для обозначения позитивности глобулиновых реакций и РВ применяется система четырех плюсов; резко положительный результат (4+), положительный – 3+, слабоположительный – 2+ и сомнительный – 1+.
В серологической лаборатории ставятся реакция Вассермана, реакция Ланге с коллоидным золотом, РИТ, РИФ, РИФЦ (реакция иммунофлуюоресценции с цельным ликвором), а также реакция ТРНА, либо реакция FTAABS, либо реакция IgM TPHA. Отрицательная реакция ТРНА, либо FTAABS исключает нейросифилис. Положительная реакция IgMTPHA со спинномозговой жидкостью и индекс ТРНА свыше 10 подтверждают наличие сифилитического процесса в ЦНС. Использование РИФ также целесообразно при лик-вородиагностике сифилиса. Особенно высокочувствителен и специфичен тест с цельным ликвором (РИФц). РИБТ со спинномозговой жидкостью по оценке результатов аналогична таковой при исследовании сыворотки крови. Применение РИФ РИБТ и IgM ТРНА расширяет возможности выявления сифилитического поражения нервной системы.
При ранних формах нейросифилиса более выражены количественные отклонения цитоза, концентрации белка, сочетающиеся с минимальной патологией коллоидной реакции. Тяжелые паренхиматозные сифилитические поражения головного и спинного мозга сопровождаются выраженными изменениями коллоидных реакций до пяти или шести «шестерок» в реакции Ланге.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55